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Doch die FFF basiert auf der Trennung im Flussfeld und nicht auf der Wechselwirkung mit einer stationären Phase Sie kann daher auch für Proteine verwendet werden die dazu neigen an SEC-Säulen zu adsorbieren Sie eignet sich auch besser für Partikel und Moleküle die zu groß für eine einfache SEC-Analyse sind oder einen Molekulargewichtsbereich aufweisen der für die Trennung auf einer einzigen SEC-Säule ungeeignet ist Der typische Aufbau einer FFF ist in Bild 3 dargestellt Eine Nettoabwärtsströmung – oder auch „Querströmung“ – konzentriert die Partikel gegen die Membran am Boden des Kanals Die Partikeldiffusion wirkt dieser Konzentration entgegen Kleinere schneller diffundierende Partikel gelangen daher weiter nach oben in den Kanal Eine zweite Längsströmung transportiert die Partikel entlang des Kanals Aufgrund des parabolischen Strömungsprofils erfahren Partikel die weiter nach oben in den Kanal diffundieren einen höheren durchschnittlichen Querstrom und werden schneller aus dem Kanal gespült Die Elutionsreihenfolge ist gegenüber SEC umgekehrt d h kleine Partikel eluieren zuerst Zur Quantifizierung der AAV-Aggregation wird FFF empfohlen um die Ergebnisse von SEC zu bestätigen da die SEC-Säule einen Teil der AAV-Aggregate entweder durch Säulenfiltration oder Scherabbau entfernen kann Neben AAV und großen viralen Vektoren wird FFF-MALS auch für die Analyse von Lipid-Nanopartikeln und extrazellulären Vesikeln eingesetzt da die Trennung äußerst „sanft“ zur Probe ist Drei Proben von Lipid-Nanopartikeln LNPs wurden zunächst mittels DLS untersucht Wie in Bild 4 zu sehen ist sind die Unterschiede recht subtil Mit FFF-MALS ist eine weitaus detailliertere Größenverteilung für jede Probe zu erkennen In Kombination mit UV-Absorptionsund dRI-Detektoren ist es möglich die eingekapselte mRNA zu quantifizieren entweder durch Beobachtung der Unterschiede im Molekulargewicht von Lipiden und mRNA oder durch direkte Messung des Peaks der freien mRNA Zusammenfassung Die beiden Lichtstreumethoden MALS und DLS eignen sich zur Quantifizierung und zur Beurteilung von viralen Vektoren und anderen Nanopartikeln wie Liposomen LNPs und extrazellulären Vesikeln Da SEC und FFF verschiedene Größenbereiche und Verfahren abdecken ergänzen sie sich So ist es auch möglich eine Methode zur Hand zu haben wenn die andere aufgrund von Einschränkungen nicht eingesetzt werden kann AUTOR Dr David Golonka Wyatt Technology Europe GmbH Dernbach Tel 02689 925-0 info@wyatt eu www wyatt com www labo de Fusion der Stärken www shimadzu de gcmstq8050-nx Der Triple-Quadrupol GCMS-TQ8050 NX ist ideal für die Ultraspurenanalyse Er fusioniert die Stärken eines weltweit führenden GC mit einem neu entwickelten Detektor • Überlegene Leistung dank NX-Technologien für jede analytische Aufgabe • MS-Detektor mit Technik • Umfassendes Zubehör für jede Applikation noisecancelling