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LC-MS MS-Analyse der B-Vitamine Direkt im Anschluss an die Wiederholinjektionen des 1-µg ml-Standardmixes wurde eine Standardreihe mit Konzentrationen zwischen 3 ng ml und 10 µg ml auf beiden LC-Setups injiziert Anhand der Ergebnisse der Standardreihe wurden die Quantifizierungsgrenzen LOQ der B-Vitamine auf beiden LC-Systemkonfigurationen abgeschätzt Eine Verbesserung des LOQ um Faktor 3 – 10 wurde auf dem Premier-Setup für FMN Thiamin PLP und Pantothensäure erreicht Die HPS-Technologie minimiert die Wechselwirkungen zwischen den B-Vitaminen und der inneren metallischen Oberflächen des Fließweges in LC-System und -Säule Damit reduziert sich ebenfalls das Risiko einer Verschleppung das häufig bei der LC-Analyse von B-Vitaminen zu beobachten ist In Bild 4 sind LC-MS MS-Chromatogramme von vier B-Vitaminen im Vergleich gezeigt die Blankinjektionen auf dem Standardund dem Premier-Setup direkt nach der Injektion des höchsten Standards der Kalibrierreihe 10 µg ml zeigen Verschleppung von 0 03 – 0 1 % wurden für Riboflavin Pyridoxal 5-Methyltetrahydrofolat und Methylcobalamin ausschließlich in der Blankinjektion auf dem Standard-Setup gefunden während die Blankinjektion auf dem Premier-Setup keine Peaks zeigt Die Maxpeak HPS-Technologie reduziert folglich das Risiko von Verschleppungen bei der LC-MS MS-Analyse von B-Vitaminen Fazit Der direkte Vergleich zwischen dem Premier-Setup mit Acquity Premier System und Acquity Premier BEH C 18 -Säule und dem Standard-Setup mit Acquity UPLC H-Class Plus und einer Acquity UPLC BEH C 18 -Säule zeigte deutliche Verbesserungen bei der Bestimmung von B-Vitaminen mit LC-MS MS Dazu gehören schärfere und symmetrischere Peakformen größere Peakhöhen und -flächen höhere Empfindlichkeit ein vermindertes Risiko für Carry-Over und die Möglichkeit Thiaminpyrophosphat in die Analyse zu integrieren Diese Punkte können helfen B-Vitamine in niedrigeren Konzentrationen mit höherer Genauigkeit und Präzision sowie mehr Zuverlässigkeit zu quantifizieren Damit bietet der Premier-Setup mit Maxpeak HPS Technologie eine geeignetere Lösung für die Analyse von Vitaminen der B-Gruppe AUTOREN Dr Claudia Rathmann Waters GmbH Eschborn Dr Jinchuan Yang Paul D Rainville Waters Corporation Milford MA USA www waters com Referenzen [1] Wakamatsu A Morimoto K Shimizu M Kudoh S A Severe Peak Tailing of Phosphate Compounds Caused by Interaction with Stainless Steel Used for Liquid Chromatography and Electrospray Mass Spectrometry J Sep Sci 2005 28 1823–1830 [2] Asakawa Y Tokida N Ozawa C Ishiba M Tagaya O Asakawa N Suppression Effects of Carbonate on the Interaction between Stainless Steel and Phosphate Groups of Phosphate Compounds in High-Performance Liquid Chromatography and Electrospray Ionization Mass Spectrometry J Chromatogr A 2008 1198–1199 80–86 [3] Lauber M Walter T H DeLano M Gilar M Boissel C Smith K Birdsall R Rainville P Belanger J Wyndham K Low Adsorption HPLC Columns Based on MaxPeak High Performance Surfaces Waters White Paper 720006930EN 2020 [4] Birdsall R E Kellet J Ippoliti S Ranbaduge N Shion H Yu Y Q Increasing Chromatographic Performance of Acidic Peptides in RPLC-MSbased Assays with ACQUITY PREMIER featuring Max-Peak HPS Technology Waters Application Note 720007003EN 2020 [5] Boissel C Walter T H Improved Peak Shape and Wide Selectivity Range with ACQUITY PREMIER Columns Waters Application Note 720007014EN 2020 [6] Smith K Mand Rainville P Utilization of MaxPeak High Performance Surfaces for Improved Separation and Recovery of Analytes Associated with the Tricarboxylic Acid Cycle Waters Application Note 720006727EN 2020 [7] Brennan K Lame M L Donegan M Rainville P D Improved Oligonucleotide SPE-LC-MS Analysis Using MaxPeak High Performance Technology Waters Application Note 720007019EN 2020 [8] Official Methods of Analysis 2019 21st Ed AOAC INTERNA-TIONAL Rockville MD Method 2015 14 www eoma aoac org [accessed on June 19 2020] 21 www labo de 11 2021 Chromatographie und Spektroskopie Bild 4 LC-MS MS-Chromatogramme von Blankinjektionen die direkt auf eine 10-µg ml-Standardinjektion folgten Premier-Setup A Standard-Setup Bund 10 µg ml Standardlösung C Carry-Over zwischen 0 03 – 0 1 % wurde bei den vier B-Vitaminen Riboflavin Pyridoxal 5-Methyl-THF und Methylcobalamin mit dem Standard-Systemaufbau Bdetektiert Mit dem Premier-Setup Awurde keine Verschleppung beobachtet Bild Waters