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Arbeitsablauf Im Folgenden werden Verfahren und Arbeitsschritte bei Einsatz des microproof Legionella Quantification Lyokit das mit allen gängigen Real-Time PCR-Geräten kompatibel ist beschrieben Die Legionellenanalytik mittels PCR beruht auf der in Laboren bereits gut etablierten Membranfiltration Ein beliebiges Wasservolumen wird hierbei über PES-Membranen filtriert Nicht filtrierbare Wässer können ohne Vorbehandlung direkt prozessiert werden Ein drittes Protokoll ermöglicht es zudem eine Probe aufzuteilen und parallel mittels PCR und der Kultur nach ISO 11731 zu analysieren Diese drei Protokolle unterscheiden sich nur in den ersten Schritten der Probenbehandlung es folgen im Anschluss die Lebend totUnterscheidung und die DNA-Extraktion Für diese gemeinsamen Schritte sind etwa 30 Minuten Bearbeitungszeit für zehn Proben einzuplanen wobei mehr als die Hälfte auf Inkubationszeiten entfällt in der andere Laborarbeit verrichtet werden kann Damit die PCR lebende von toten Zellen unterscheiden kann erfolgt ein Behandlungsschritt mit der Reagenzie Reagent Dvon Biotecon Diagnostics Dieses Reagenz dringt nur in zellmembrangeschädigte also tote Zellen ein und bindet irreversibel an die DNA Diese modifizierte DNA wird später nicht in der PCR detektiert das Endergebnis entspricht folglich der LegionellaLebendzellzahl Anschließend erfolgt die eigentliche Analyse in einem Real-Time-PCR-Gerät In einem Durchlauf können bis zu 94 Proben parallel analysiert werden die Laufzeit beträgt unabhängig von der Probezahl 2 ½ Stunden Das Verfahren lässt sich darüber hinaus auch für die Bestätigung von Legionella-Kolonien nach ISO 11731 einsetzen Hierbei vereinfacht sich der gesamte Arbeitsablauf so weit dass pro Kolonie weniger als eine Minute Bearbeitungszeit benötigt wird Die Laufzeit der PCR verkürzt sich ebenfalls in etwa einer Stunde liegt das finale Ergebnis für bis zu 94 Kolonien vor Literatur Collins S Stevenson D Walker Jand Bennett A 2017 Evaluation of Legionella realtime PCR against traditional culture for routine and public health testing of water samples J Appl Microbiol 122 1692-1703 https doi org 10 1111 jam 13461 ___________________________________________ AUTOR Dipl -Ing Lukas Weise BIOTECON Diagnostics GmbH Potsdam Tel 0331 2300-200 bcd@bcdiagnostics com www bcdiagnostics com ___________________________________________ Schwerpunkt | Wasseranalytik 24 3 2021 www labo de Der Einsatz des Mittels Reagent Dvon Biotecon Diagnostics macht bei der PCR-Methode die Lebend tot-Unterscheidung möglich Bild BIOTECON Diagnostics